Calpain 3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402788-NIC

Das humane Gen **CAPN3** kodiert **Calpain 3**, eine in der Skelettmuskulatur angereicherte, calciumabhängige Cysteinprotease, die zur Aufrechterhaltung der Sarkomerstruktur und zum dynamischen Umbau myofibrillärer Proteine beiträgt. Die Aktivität von Calpain 3 ist mit Proteostase‑Signalwegen verknüpft, darunter regulierte Proteolyse und der Turnover struktureller Komponenten, die die Integrität der Muskelfaser sowie die Anpassung an mechanische Belastung unterstützen. Eine veränderte **CAPN3**‑Funktion ist mit Phänotypen der Gliedergürtelmuskeldystrophie assoziiert, was diesen Lokus zu einem häufig untersuchten Modell macht, um Mechanismen der Muskeldegeneration und einer beeinträchtigten Regeneration zu analysieren. **CAPN3**‑Forschung wird häufig mit Untersuchungen zur Calcium‑Signalgebung, zur Organisation des Zytoskeletts und zu Stressantworten in differenzierten Myozyten verknüpft.

Calpain 3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAPN3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAPN3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAPN3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAPN3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.