Calpain 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401113

Übersicht

CAPN2 kodiert Calpain-2, eine ubiquitär vorkommende, Ca²⁺-abhängige Cysteinprotease, die eine begrenzte Proteolyse von Zytoskelett- und Signalproteinen durchführt, um die zelluläre Architektur umzubauen. Die Aktivität von Calpain-2 trägt zum Turnover fokaler Adhäsionen, zum Membrantransport und zur Modulation von Kinase- und Phosphatase-Signalwegen bei und greift damit in Signalnetzwerke ein, die Migration, Überleben und Stressantworten steuern. Durch die regulierte Spaltung von Substraten, die an Zellzyklusprogression und Apoptose beteiligt sind, hilft CAPN2, Proteostase und adaptive Signalgebung während Entzündungen und Gewebeumbau fein abzustimmen. Eine dysregulierte Calpain-2-Aktivität wurde mit aberranter Motilität und invasiven Phänotypen, neurodegenerativen Prozessen im Zusammenhang mit exzitotoxischem Kalziumeinstrom sowie veränderten Reaktionen auf oxidativen oder mechanischen Stress in Verbindung gebracht.

Das Calpain 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CAPN2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CAPN2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CAPN2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Calpain 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CAPN2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Calpain 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CAPN2-Exone abzielen, die für die Calpain 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CAPN2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Calpain 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Calpain 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CAPN2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Calpain 2 HDR-Plasmid (h) und Calpain 2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CAPN2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CAPN2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.