Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calpain 15: sc-411016-ACT

Le gène humain **CAPN15** code la calpaïne 15, un membre atypique de la famille des calpaïnes, des protéases à cystéine dépendantes du calcium impliquées dans une protéolyse régulée qui module le renouvellement des protéines et les sorties de signalisation. L’activité des calpaïnes peut influencer le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et les voies de réponse au stress par un clivage limité des substrats plutôt que par une dégradation massive, ajustant ainsi l’homéostasie cellulaire. L’expression de **CAPN15** a été étudiée dans le contexte du développement des tissus et de la régulation des états cellulaires, où une signalisation protéasique altérée peut affecter les programmes de différenciation ainsi que la fonction neuronale ou épithéliale. Une protéolyse dérégulée liée aux calpaïnes a été associée dans la littérature à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, l’inflammation et la signalisation liée au cancer, ce qui fait de **CAPN15** une cible d’intérêt pour la cartographie des voies et la génomique fonctionnelle.

Calpain 15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAPN15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calpain 15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAPN15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAPN15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calpain 15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAPN15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calpain 15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calpain 15 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAPN15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.