Calpain 15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411016-ACT

ヒトCAPN15は、カルシウム依存性システインプロテアーゼであるカルパインファミリーの非典型的メンバー、カルパイン15をコードします。カルパインは、タンパク質を一括して分解するのではなく基質を限定的に切断することで、タンパク質の代謝回転やシグナル出力を形作る制御されたプロテオリシスに関与します。カルパイン活性はこのような限定分解を通じて、細胞骨格の再構築、小胞輸送、ストレス応答性経路に影響を与え、細胞の恒常性を微調整し得ます。CAPN15の発現は、組織発生や細胞状態の制御という文脈で研究されており、プロテアーゼシグナルの変化が分化プログラムや神経・上皮機能に影響する可能性があります。カルパイン関連プロテオリシスの破綻は、神経変性、炎症、がん関連シグナルに関わる機序と結び付けて報告されており、CAPN15は経路マッピングや機能ゲノミクスの標的として位置づけられます。

Calpain 15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAPN15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calpain 15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAPN15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAPN15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calpain 15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAPN15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalpain 15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAPN15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalpain 15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。