Plasmide Double Nickase (h) Calpain 1: sc-400929-NIC

Le gène humain **CAPN1** code la calpaïne 1, une protéase à cystéine dépendante du calcium qui réalise une protéolyse limitée de protéines du cytosquelette et de la signalisation afin de moduler l’adhérence, la migration, le remodelage membranaire et la fonction synaptique. L’activité de la calpaïne 1 est étroitement contrôlée par la dynamique intracellulaire du Ca²⁺ et par son inhibiteur endogène, la calpastatine, ce qui relie **CAPN1** à la transduction du signal régulée par le Ca²⁺, au renouvellement des adhésions focales et aux voies de la protéostase. Une dérégulation des clivages médiés par les calpaïnes a été associée aux réponses aux lésions neuronales, à des processus neurodégénératifs et à des altérations de l’homéostasie musculaire et cytosquelettique, faisant de **CAPN1** un nœud pertinent pour étudier le remodelage dépendant du stress et les programmes de survie cellulaire. La perturbation de **CAPN1** peut également influencer des réseaux de phosphorylation en aval ainsi que des événements de maturation protéolytique qui façonnent les cascades de signalisation inflammatoires et apoptotiques.

Calpain 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAPN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAPN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAPN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAPN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.