Calpain 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400929-NIC

Das humane CAPN1 kodiert Calpain 1, eine calciumabhängige Cysteinprotease, die durch begrenzte Proteolyse von Zytoskelett- und Signalproteinen Adhäsion, Migration, Membranumbau und synaptische Funktion moduliert. Die Aktivität von Calpain 1 wird streng durch die intrazelluläre Ca²⁺-Dynamik und seinen endogenen Inhibitor Calpastatin kontrolliert und verknüpft CAPN1 damit mit der Ca²⁺-regulierten Signaltransduktion, dem Turnover fokaler Adhäsionen und proteostatischen Signalwegen. Eine fehlregulierte, calpainvermittelte Spaltung wurde mit neuronalen Verletzungsantworten, neurodegenerativen Prozessen sowie einer veränderten Muskel- und Zytoskelett-Homöostase in Verbindung gebracht, was CAPN1 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung stressabhängiger Remodeling- und Zellüberlebensprogramme macht. Störungen von CAPN1 können zudem nachgeschaltete Phosphorylierungsnetzwerke und proteolytische Prozessierungsschritte beeinflussen, die entzündliche und apoptotische Signalkaskaden prägen.

Calpain 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAPN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAPN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAPN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAPN1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.