cadherin-26 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-436285-ACT

Das murine Gen **Cdh26** kodiert **Cadherin-26**, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül aus der Cadherin-Superfamilie, das zur Organisation epithelialer Gewebe und zur Aufrechterhaltung der Barriereintegrität beiträgt. Über Interaktionen, die mit Adherens Junctions verknüpft sind, unterstützt Cadherin-26 die Zellpolarität, kontaktabhängige Signalübertragung und die koordinierte Regulation der Zytoskelettdynamik, welche die epitheliale Differenzierung und das Remodeling beeinflusst. Veränderte Cadherin-Expressionsmuster sind häufig mit Änderungen in Adhäsion, Migration und entzündlichen Gewebereaktionen verbunden, wodurch **Cdh26** ein nützliches Ziel für die Untersuchung der epithelialen Homöostase und kontextabhängiger Remodeling-Programme darstellt. In Mausmodellen kann die Modulation von **Cdh26** helfen zu untersuchen, wie Adhäsionsnetzwerke in Barrieregeweben mit entwicklungs- und immunassoziierten Signalwegen zusammenwirken.

cadherin-26 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cdh26-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cadherin-26 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cdh26-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cdh26-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cadherin-26-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cdh26-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cadherin-26-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cadherin-26-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cdh26-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.