cadherin-22 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401942-ACT

CDH22 kodiert Cadherin‑22, einen calciumabhängigen Zell‑Zell‑Adhäsionsrezeptor aus der Cadherin‑Superfamilie, der die Gewebearchitektur durch homophile Interaktionen sowie durch die Kopplung an Catenine und das Aktin‑Zytoskelett stabilisiert. Durch die Modulation des Aufbaus von Adhärenskontakten und kontaktabhängiger Signalwege kann Cadherin‑22 die Organisation von Epithel- und Nervengewebe, die Zellpolarität und das Migrationsverhalten beeinflussen. Veränderte Cadherin‑Expressionsmuster werden häufig mit gestörter Adhäsion, invasionsassoziierten Phänotypen und einem Umbau der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht, was CDH22 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der Zell‑Zell‑Kommunikation macht. Die Expression von CDH22 wurde zudem im Kontext von Linienfestlegung und Differenzierung untersucht, in denen cadherinvermittelte Adhäsion mit Entwicklungsprogrammen zusammenwirkt.

cadherin-22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH22-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

cadherin-22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH22-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH22-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen cadherin-22-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH22-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von cadherin-22-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des cadherin-22-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH22-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.