Plasmide CRISPR d'Activation (h) cadherin-22: sc-401942-ACT

CDH22 code la cadhérine‑22, un récepteur d’adhésion cellule–cellule dépendant du calcium appartenant à la superfamille des cadhérines, qui contribue au maintien de l’architecture tissulaire via des interactions homophiles et son couplage aux caténines et au cytosquelette d’actine. En modulant l’assemblage des jonctions d’adhérence et la signalisation dépendante du contact, la cadhérine‑22 peut influencer l’organisation épithéliale et neuronale, la polarité cellulaire et le comportement migratoire. Des profils d’expression des cadhérines altérés sont fréquemment associés à une adhésion dérégulée, à des phénotypes liés à l’invasion et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui fait de CDH22 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la communication intercellulaire. L’expression de CDH22 a également été étudiée dans des contextes de spécification de lignée et de différenciation, où l’adhésion médiée par les cadhérines s’entrecroise avec les programmes développementaux.

cadherin-22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH22 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cadherin-22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH22 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cadherin-22. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH22 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cadherin-22 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cadherin-22 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH22 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.