Plasmide Double Nickase (h) CA VIII: sc-403750-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CA VIII correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CA VIII Double Nickase (h) et le plasmide CA VIII Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CA8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CA VIII Antibody (E-4): sc-166626
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CA VIII | sc-403750-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CA VIII | sc-403750-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’anhydrase carbonique VIII (CA VIII), codée par le gène humain **CA8**, est un membre acatalytique de la famille des anhydrases carboniques, qui module la signalisation intracellulaire plutôt que l’hydratation du CO₂. CA VIII se lie au récepteur de l’inositol 1,4,5‑trisphosphate de type 1 (**ITPR1**) et l’inhibe, modulant ainsi la libération de Ca²⁺ dépendante de l’IP₃ à partir du réticulum endoplasmique, et influençant de ce fait l’excitabilité neuronale, la plasticité synaptique et la coordination motrice cérébelleuse. Par son impact sur des voies régulées par le Ca²⁺, notamment celles impliquant la CaMK et des programmes transcriptionnels dépendants de la calcineurine, CA8 contribue au contrôle homéostatique de la signalisation calcique. La perturbation génétique ou la dérégulation de **CA8** a été associée à des dysfonctionnements cérébelleux et à une neurobiologie liée à l’ataxie, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation calcique dans les systèmes neuronaux.
CA VIII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CA8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CA8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CA8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CA8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.