CA VI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419456

Übersicht

Car6 kodiert die Carboanhydrase VI (CA VI), ein sezerniertes Zink-Metalloenzym, das die reversible Hydratisierung von CO₂ zu Bicarbonat und Protonen katalysiert und so die extrazelluläre pH-Pufferung sowie die Bicarbonat-Homöostase in drüsigen und mukosalen Umgebungen unterstützt. Durch die Beeinflussung der Protonendynamik trägt CA VI zu Prozessen bei, die mit epithelialem Ionentransport und der pH-Kontrolle im Mikromilieu verknüpft sind und die Enzymaktivität, Matrixinteraktionen und zelluläre Signalgebung beeinflussen können. In Mausmodellen wird die Car6-Expression häufig genutzt, um die von Carboanhydrasen abhängige Regulation des extrazellulären Säure-Basen-Gleichgewichts in sekretorischen Geweben zu untersuchen. Eine gestörte pH-Kontrolle ist für Modelle von Entzündung, Gewebeumbau und metabolischem Stress breit relevant, wodurch Car6 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien pH-sensitiver Phänotypen darstellt.

Das CA VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Car6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Car6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Car6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CA VI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Car6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CA VI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Car6-Exone abzielen, die für die CA VI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Car6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CA VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CA VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Car6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CA VI HDR-Plasmid (m) und CA VI HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Car6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Car6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.