C8β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408409

Descripción general

C8B codifica la cadena beta del componente C8 del complemento (C8β), una subunidad esencial del heterotrímero C8 (C8α, C8β, C8γ) que participa en la activación terminal del complemento. En las cascadas del complemento clásica, de las lectinas y alternativa, C8β ayuda a estabilizar el ensamblaje del complejo de ataque a la membrana (MAC; C5b-9) sobre las membranas diana, promoviendo la formación de poros y la función efectora lítica. Esta actividad contribuye a la defensa inmunitaria innata, a la señalización inflamatoria y a la comunicación cruzada con procesos relacionados con la opsonización y la coagulación. La alteración de la función terminal del complemento, incluida la desregulación del MAC, se asocia con susceptibilidad a infecciones y con daño tisular mediado por el sistema inmunitario, lo que respalda a C8B como una diana relevante para la investigación en inmunología e inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO C8β (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C8B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C8B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C8B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C8β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C8B para la investigación de la señalización de C8β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de C8B críticos para la función de C8β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C8B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido C8β CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido C8β CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C8B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C8β (h) y el plásmido HDR C8β (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C8B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C8B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.