Plasmide CRISPR d'Activation (h) C7: sc-404773-ACT

Le composant 7 du complément (C7) code une protéine terminale du complément qui s’assemble avec C5b, C6, C8 et C9 pour former le complexe d’attaque membranaire (MAC), un effecteur formant des pores de l’immunité innée. Par l’activation des voies du complément classique, des lectines ou alternative, C7 contribue à la lyse des agents pathogènes, à l’élimination des complexes immuns et à la modulation des signaux inflammatoires à la surface des cellules. Une activité du complément dérégulée, incluant un engagement aberrant de la voie terminale, est impliquée dans des pathologies inflammatoires et auto-immunes et a été étudiée dans des contextes tels que la susceptibilité aux infections et les lésions tissulaires médiées par le complément. Au-delà de la défense antimicrobienne, la formation du MAC peut influencer les réponses au stress cellulaire et la production de cytokines, reliant la biologie de C7 à une homéostasie immunitaire plus large.

C7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C7 dans les cellules tumorales présentant une expression de C7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.