Plasmide CRISPR/Cas9 KO C6orf130 (h): sc-415131

Présentation

OARD1 (C6orf130) est un gène humain codant une protéine dont l’annotation fonctionnelle reste limitée, mais les données disponibles suggèrent un rôle dans la régulation de l’homéostasie cellulaire via des interactions protéiques influençant l’expression génique et des processus sensibles au stress. Les profils d’expression et les associations génétiques ont impliqué ce locus dans des voies liées à la fonction neuronale et à la régulation métabolique, où une activité altérée pourrait contribuer à des phénotypes de maladies complexes. En tant que facteur encore incomplètement caractérisé, C6orf130 est fréquemment étudié afin de déterminer sa localisation subcellulaire, ses partenaires d’interaction et les conséquences transcriptionnelles ou de signalisation en aval. Les études de perte de fonction aident à préciser si OARD1 affecte la croissance cellulaire, la différenciation ou les réponses adaptatives au stress protéotoxique ou oxydatif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C6orf130 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OARD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OARD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OARD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C6orf130.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OARD1 pour l'étude de la signalisation de C6orf130, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OARD1 essentiels à la fonction de C6orf130
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OARD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C6orf130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le C6orf130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OARD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C6orf130 plasmide HDR (h) et le C6orf130 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OARD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OARD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.