C5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401533-LAC

Komplementkomponente 5 (C5) ist ein zentraler Effektor der Komplementkaskade, der die Aktivität der C3-Konvertase mit der Bildung der C5-Konvertase und der anschließenden Generierung von C5a und C5b verknüpft. Die proteolytische Spaltung von C5 erzeugt C5a, ein potentes Anaphylatoxin, das über C5a-Rezeptoren signalisiert und die Chemotaxis von Leukozyten, die Zytokinfreisetzung und die vaskuläre Entzündung reguliert, sowie C5b, das die Assemblierung des terminalen Komplementkomplexes (MAC, C5b-9) initiiert, der anfällige Zellen lysieren kann. Über diese Prozesse integriert C5 die angeborene Immunerkennung mit inflammatorischer Verstärkung, der Unterstützung der Opsonophagozytose und der Erregerelimination. Eine fehlregulierte C5-Aktivierung ist an der Pathobiologie entzündlicher und autoimmuner Erkrankungen sowie an komplementvermittelten Gewebeschäden beteiligt, was mechanistische Studien in Immun- und Gefäßmodellen motiviert.

C5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente C5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

C5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der C5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen C5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen C5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.