Plasmide CRISPR/Cas9 KO C4BP (m): sc-419394

Présentation

Le gène murin **C4bp** code la **protéine de liaison à C4b (C4BP)**, un régulateur soluble des voies classique et lectine du complément, qui se lie au C4b activé afin de favoriser son inactivation médiée par le facteur I et de limiter la formation de la convertase C3. En freinant l’amplification du complément, C4BP contribue au maintien de l’homéostasie immunitaire, favorise l’élimination des complexes immuns et du matériel apoptotique, et module les signaux inflammatoires dans le milieu extracellulaire. Une dérégulation du contrôle du complément impliquant C4BP a été mise en cause dans des contextes tels que l’auto-immunité, l’inflammation associée aux infections et les lésions tissulaires, où une activation excessive du complément contribue à la pathologie. En tant que nœud de régulation du complément, **C4bp** est pertinent pour l’étude de l’immunité innée, des réseaux inflammatoires et des interactions hôte–pathogène dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C4BP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C4bp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C4bp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C4bp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C4BP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C4bp pour l'étude de la signalisation de C4BP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C4bp essentiels à la fonction de C4BP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C4bp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C4BP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C4BP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus C4bp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C4BP plasmide HDR (m) et le C4BP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C4bp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C4bp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.