Plasmide CRISPR/Cas9 KO C23 (Nucleolin) (m): sc-421835

Présentation

Ncl code pour C23 (nucléoline), une phosphoprotéine nucléolaire abondante qui coordonne la transcription des ARNr, le traitement du pré-ARNr et l’assemblage des ribosomes, soutenant l’homéostasie globale des protéines et la croissance cellulaire. La nucléoline navette également entre le noyau, le cytoplasme et la surface cellulaire, où elle influence l’organisation de la chromatine, les réponses aux dommages de l’ADN, la stabilité des ARNm et des sorties de signalisation liées à l’adaptation au stress. Par ses interactions avec la machinerie de l’ARN polymérase I, des complexes ribonucléoprotéiques et des régulateurs clés du cycle cellulaire, C23 intègre la fonction du nucléole aux voies de prolifération et d’apoptose. Une expression ou une localisation dérégulées de la nucléoline ont été associées à une biogenèse ribosomique altérée, à des programmes de traduction aberrants et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait une cible fréquente dans les études de biologie tumorale et de stress cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C23 (Nucleolin) (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ncl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ncl, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ncl à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C23 (Nucleolin).

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ncl pour l'étude de la signalisation de C23 (Nucleolin), les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ncl essentiels à la fonction de C23 (Nucleolin)
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ncl pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C23 (Nucleolin) plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C23 (Nucleolin) plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ncl. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C23 (Nucleolin) plasmide HDR (m) et le C23 (Nucleolin) (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ncl pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ncl définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.