C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421835

Übersicht

Ncl kodiert C23 (Nukleolin), ein häufig vorkommendes nukleoläres Phosphoprotein, das die rRNA-Transkription, die Prozessierung der prä-rRNA und den Zusammenbau von Ribosomen koordiniert und damit die globale Proteostase und das Zellwachstum unterstützt. Nukleolin pendelt zudem zwischen Zellkern, Zytoplasma und Zelloberfläche und beeinflusst dadurch die Chromatinorganisation, DNA-Schadensantworten, die Stabilität von mRNA sowie signalgebundene Outputs, die mit Stressanpassung verknüpft sind. Über Interaktionen mit der RNA-Polymerase-I-Maschinerie, Ribonukleoprotein-Komplexen und zentralen Zellzyklusregulatoren integriert C23 die nukleoläre Funktion in Signalwege von Proliferation und Apoptose. Eine fehlregulierte Expression oder Lokalisation von Nukleolin wird mit veränderter Ribosomenbiogenese, aberranten Translationsprogrammen und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb es häufig im Fokus von Studien zur Tumorbiologie und zum zellulären Stress steht.

Das C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ncl-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ncl-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ncl nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C23 (Nucleolin)-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ncl-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C23 (Nucleolin)-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ncl-Exone abzielen, die für die C23 (Nucleolin)-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ncl-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ncl-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C23 (Nucleolin) HDR-Plasmid (m) und C23 (Nucleolin) HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ncl-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ncl-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.