C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419389

Übersicht

Komplementkomponente 2 (C2) ist ein zentrales Serinprotease-Zymogen der klassischen und der Lektin-Komplementkaskade in der Maus. Es wird durch C1s oder MASP2 gespalten, wodurch C2a entsteht und die C3-Konvertase (C4b2a) gebildet wird. Dieser Schritt treibt die Amplifikation der Komplementaktivierung, Opsonisierung, inflammatorische Signalübertragung und die nachgeschaltete Bildung des Membranangriffskomplexes voran und verbindet damit die angeborene Immunerkennung mit der Beseitigung von Immunkomplexen und Pathogenen. Die C2-Aktivität steht in Wechselwirkung mit Zytokinnetzwerken und Fc-Rezeptor-abhängigen Antworten und prägt so die Rekrutierung von Leukozyten sowie die Antigenpräsentation in Immungeweben. Veränderte C2-Funktion ist für Untersuchungen zur Komplement-Dysregulation im Zusammenhang mit Autoimmunität, erhöhter Infektanfälligkeit und Mechanismen entzündlicher Gewebeschädigung von breiter Relevanz.

Das C2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C2-Exone abzielen, die für die C2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom C2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C2 HDR-Plasmid (m) und C2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.