Plásmido CRISPR de Activación (h) C1orf68: sc-403506-ACT

C1orf68 humano (open reading frame 68 del cromosoma 1) codifica una proteína poco caracterizada, con una anotación funcional limitada y evidencia emergente de una expresión dependiente del contexto en distintos tejidos y estados de enfermedad. Aunque las vías moleculares específicas aún no se han esclarecido por completo, estudios a nivel de transcritos sugieren que C1orf68 puede participar en programas celulares vinculados con la diferenciación, las respuestas al estrés y la regulación de redes de expresión génica. Se han reportado patrones de expresión alterados en múltiples conjuntos de datos ómicos, lo que respalda su uso como gen candidato para estudios mecanísticos de señalización y control transcripcional en modelos celulares relevantes para enfermedad. Investigar C1orf68 puede ayudar a aclarar cómo genes de open reading frame poco estudiados contribuyen a la remodelación de vías y a la variación fenotípica.

C1orf68 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C1orf68 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C1orf68 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C1orf68 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C1orf68, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C1orf68. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C1orf68 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C1orf68 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C1orf68 en células tumorales con expresión de C1orf68 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.