Plasmide CRISPR d'Activation (h) C15orf39: sc-412724-ACT

C15orf39 code une protéine humaine encore mal caractérisée et faiblement annotée sur le plan fonctionnel, mais les données disponibles étayent un rôle dans des processus fondamentaux d’homéostasie cellulaire, tels que la régulation de l’expression génique et le renouvellement des protéines. Des observations transcriptomiques et protéomiques suggèrent que C15orf39 pourrait participer à des voies influençant la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et l’adaptation mitochondriale ou métabolique, selon le contexte cellulaire. Une expression altérée de C15orf39 a été rapportée dans certains jeux de données associés à des maladies, indiquant une pertinence potentielle pour des programmes de prolifération dérégulés et de maintien du génome. Ainsi, la surexpression contrôlée de C15orf39 est utile pour sonder les réseaux transcriptionnels en aval et les dépendances de voies dans des modèles cellulaires humains.

C15orf39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C15orf39 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C15orf39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C15orf39 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C15orf39, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C15orf39. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C15orf39 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C15orf39 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C15orf39 dans les cellules tumorales présentant une expression de C15orf39 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.