Plasmide CRISPR/Cas9 KO C-Nap1 (m): sc-421134

Présentation

Cep250 code pour C-Nap1, une protéine centrosomale à domaines en hélice enroulée (coiled-coil), concentrée aux extrémités proximales des centrioles, où elle contribue à la cohésion du centrosome et à l’organisation du matériel péricentriolaire. C-Nap1 intervient dans la dynamique du centrosome régulée par le cycle cellulaire, en coordination avec des voies de signalisation dépendantes de kinases et des protéines d’échafaudage, afin de favoriser l’assemblage d’un fuseau bipolaire, une ségrégation fidèle des chromosomes et le maintien de l’architecture des microtubules. La perturbation de la cohésion du centrosome et de l’intégrité du fuseau est étroitement associée à l’instabilité génomique, à des altérations de la division cellulaire et à des phénotypes développementaux ou neurodégénératifs dans des systèmes modèles. Dans les études sur cellules et tissus murins, Cep250 constitue donc un point d’entrée utile pour analyser les voies associées au centrosome qui influencent la prolifération, la différenciation et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO C-Nap1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cep250 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cep250, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cep250 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine C-Nap1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cep250 pour l'étude de la signalisation de C-Nap1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cep250 essentiels à la fonction de C-Nap1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cep250 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le C-Nap1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le C-Nap1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cep250. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le C-Nap1 plasmide HDR (m) et le C-Nap1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cep250 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cep250 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.