Plasmide Double Nickase (h) c-Kit: sc-400106-NIC

KIT code pour le récepteur tyrosine kinase c-Kit (CD117), récepteur du stem cell factor (SCF) qui régule la survie, la prolifération, la migration et l'engagement de lignée des progéniteurs hématopoïétiques, des mélanocytes, des cellules germinales et des cellules interstitielles de Cajal. La dimérisation induite par le ligand et l'autophosphorylation activent les voies PI3K–AKT, RAS–MAPK, JAK–STAT et celles de la famille SRC, coordonnant la progression du cycle cellulaire et les programmes de différenciation. Une signalisation KIT dérégulée, incluant des mutations activatrices ou une expression aberrante, est impliquée dans des processus oncogéniques et associés aux mastocytes, tandis que des variants perte de fonction peuvent perturber l'hématopoïèse et la biologie de la pigmentation. Ces caractéristiques font de c-Kit une cible largement utilisée pour étudier la signalisation des récepteurs tyrosine kinases, les décisions de destin cellulaire et la diaphonie entre voies dans des modèles cellulaires humains.

c-Kit Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KIT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KIT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KIT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KIT.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.