Plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Jun (h2): sc-400077-KO-2

Présentation

JUN code pour c-Jun, un composant central du complexe de facteurs de transcription AP-1, qui intègre les signaux extracellulaires en programmes d’expression génique dépendants du contexte. c-Jun est rapidement induit par les signaux de stress et mitogènes et est régulé par phosphorylation en aval des cascades MAPK/JNK, modulant des réponses transcriptionnelles qui contrôlent la prolifération, la différenciation, l’apoptose et la signalisation inflammatoire. Par la régulation, dépendante d’AP-1, de cytokines, d’enzymes de remodelage de la matrice et de régulateurs du cycle cellulaire, c-Jun relie la transduction du signal à des modifications de l’accessibilité de la chromatine et de la production transcriptionnelle. Une activité JUN/AP-1 dérégulée a été impliquée dans la transformation oncogénique, l’invasion tumorale ainsi que dans des processus immunitaires et neuro-inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour des études mécanistiques dans des modèles de maladies humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Jun (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène JUN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du JUN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert JUN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine c-Jun.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en JUN pour l'étude de la signalisation de c-Jun, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de JUN essentiels à la fonction de c-Jun
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de JUN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le c-Jun plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le c-Jun plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus JUN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le c-Jun plasmide HDR (h) et le c-Jun (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie JUN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles JUN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.