c-Jun CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421207-ACT

Jun kodiert den Transkriptionsfaktor c-Jun, einen zentralen Bestandteil des AP-1-Komplexes, der Signaleingänge aus der MAPK-Signalkaskade integriert, um stimulusabhängige Genexpression zu steuern. c-Jun reguliert Programme, die an Zellzyklusprogression, Apoptose, Differenzierung und Entzündungsantworten beteiligt sind, durch kooperatives Binden mit Proteinen der FOS-Familie an AP-1-Bindungsstellen. In Mausmodellen wird die JUN/AP-1-Aktivität häufig als Readout von Stress- und Zytokinsignalen verwendet und verknüpft dabei vorgeschaltete Signalwege wie JNK, ERK und p38 mit nachgeschalteten transkriptionellen Umbauprozessen. Eine Fehlregulation der c-Jun-Signalisierung wird mit onkogener Transformation, Gewebeumbau und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, wodurch Jun einen häufigen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Kopplung von Signalübertragung und Transkription darstellt.

c-Jun Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Jun-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

c-Jun Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Jun-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Jun-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen c-Jun-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Jun-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von c-Jun-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des c-Jun-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Jun-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.