c-IAP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400762-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das c-IAP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- c-IAP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und c-IAP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BIRC3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: c-IAP2: sc-517317
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
c-IAP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400762-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
c-IAP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400762-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIRC3 kodiert den humanen „cellular inhibitor of apoptosis protein 2“ (c-IAP2), eine E3-Ubiquitin-Ligase, die die Signalübertragung der TNF-Rezeptor-Superfamilie reguliert, indem sie RIPK1 und verwandte Adapterproteine ubiquityliert und so die NF-κB-Aktivierung, entzündliche Antworten und Entscheidungen über Zelltod fein abstimmt. Über seine BIR-Domänen und den RING-Finger integriert c-IAP2 eine ubiquitinabhängige Kontrolle von Apoptose und Nekroptose und beeinflusst dadurch Caspase-Aktivität und Überlebenssignale als Reaktion auf Zytokine und Stress. Eine fehlregulierte BIRC3-Funktion oder -Expression ist mit veränderter Immun-Signalgebung und Apoptose-Resistenz assoziiert; wiederkehrende Störungen dieses Signalwegs werden bei hämatologischen Malignomen und anderen Krebserkrankungen beschrieben. Als Knotenpunkt in Ubiquitin-Proteasom- sowie TNF/NF-κB-Netzwerken wird BIRC3 häufig in Studien zu inflammatorischer Signalgebung, Zellüberlebens-Checkpoints und ubiquitinvermittelter Umverdrahtung von Signalwegen untersucht.
c-IAP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BIRC3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BIRC3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BIRC3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BIRC3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.