C/EBP beta CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419623-ACT

Das murine Gen **Cebpb** kodiert **C/EBP beta**, einen basischen Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der Genprogramme koordiniert, welche die myeloide Differenzierung, die Adipogenese und die Akutphasenantwort von Hepatozyten steuern. Er integriert Signale nachgeschaltet von inflammatorischen Zytokinen und Wachstumsfaktoren, um Zellzyklusprogression, Überleben und metabolisches Remodeling zu regulieren, und spielt dabei eine zentrale Rolle bei der Polarisation von Makrophagen sowie in der stressresponsiven Transkription. Die Aktivität von C/EBP beta überschneidet sich mit Signalwegen wie **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JAK/STAT** und **TGF-β** und beeinflusst dadurch Chromatinzugänglichkeit und Enhancer-Nutzung in bereits linienfestgelegten Zellen. Eine fehlregulierte **Cebpb**-Expression oder -Aktivität wurde mit inflammatorischen Phänotypen, metabolischer Dysfunktion und tumorassoziierten transkriptionellen Zuständen in Verbindung gebracht, was C/EBP beta zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur immun‑metabolischen Wechselwirkung und zur Transkriptionskontrolle macht.

C/EBP beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cebpb-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C/EBP beta Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cebpb-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cebpb-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C/EBP beta-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cebpb-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C/EBP beta-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C/EBP beta-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cebpb-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.