Plasmide CRISPR d'Activation (m) C/EBP beta: sc-419623-ACT

Le gène murin **Cebpb** code C/EBP bêta, un facteur de transcription de type « basic leucine zipper » qui coordonne des programmes géniques contrôlant la différenciation myéloïde, l’adipogenèse et la réponse de phase aiguë des hépatocytes. Il intègre les signaux en aval des cytokines inflammatoires et des facteurs de croissance afin de réguler la progression du cycle cellulaire, la survie et le remodelage métabolique, avec des rôles majeurs dans la polarisation des macrophages et la transcription induite par le stress. L’activité de C/EBP bêta recoupe des voies telles que NF-κB, MAPK/ERK, JAK/STAT et TGF-β, modulant l’accessibilité de la chromatine et l’utilisation des enhancers dans les cellules engagées dans une lignée. Une expression ou une activité dérégulée de **Cebpb** a été associée à des phénotypes inflammatoires, à des dysfonctionnements métaboliques et à des états transcriptionnels liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du dialogue immuno-métabolique et du contrôle transcriptionnel.

C/EBP beta Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cebpb sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C/EBP beta Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cebpb dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cebpb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C/EBP beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cebpb natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C/EBP beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C/EBP beta dans les cellules tumorales présentant une expression de Cebpb silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.