BTN2A2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-433634-ACT

Mouse Btn2a2 kodiert BTN2A2, ein immunregulatorisches Oberflächenprotein der Butyrophilin-Familie, das die T‑Zell-Aktivierung und die periphere Toleranz über kontaktabhängige Signale mit antigenpräsentierenden Zellen moduliert. Die BTN2A2-Aktivität beeinflusst die Funktion der immunologischen Synapse, die Zytokinproduktion und die Proliferation von Lymphozyten und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die adaptive Immunantworten in lymphatischen Geweben prägen. Veränderte BTN2A2-Expression wurde in Zusammenhängen chronischer Entzündung und autoimmunähnlicher Phänotypen untersucht, bei denen Verschiebungen in koregulatorischer Signalgebung das Gleichgewicht zwischen Effektor‑ und regulatorischen T‑Zellen beeinflussen können. Als checkpoint-assoziiertes Molekül ist BTN2A2 zudem für die Tumorimmunologie relevant, insbesondere im Hinblick auf Mechanismen der Immunflucht und T‑Zell-Dysfunktion.

BTN2A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Btn2a2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTN2A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Btn2a2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Btn2a2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTN2A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Btn2a2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTN2A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTN2A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Btn2a2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.