Plasmide CRISPR d'Activation (h) BTG2: sc-401022-ACT

BTG2 (gène de translocation des cellules B 2) code une protéine antiproliférative à induction immédiate (« immediate-early ») qui agit comme corégulateur transcriptionnel et modulateur de la désadénylation des ARNm, façonnant des programmes d’expression génique qui contrôlent la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire. BTG2 est fréquemment induit en aval de p53 et intègre des signaux favorisant le contrôle du point de contrôle G1/S, la différenciation et l’apoptose via des interactions avec des composants du complexe CCR4–NOT et d’autres cofacteurs régulateurs. Une expression altérée de BTG2 a été associée à une prolifération dérégulée et à une instabilité génomique dans de multiples contextes liés au cancer ; elle est également liée à des processus inflammatoires et neurobiologiques par ses effets étendus sur la régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle. Ces propriétés font de BTG2 un nœud utile pour étudier les réseaux de contrôle de la croissance, la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et le remodelage transcriptionnel dépendant du contexte dans les cellules humaines.

BTG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BTG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BTG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BTG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BTG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BTG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BTG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BTG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BTG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BTG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.