Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BTEB2 Double Nickase Plasmid (m): sc-419372-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BTEB2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BTEB2 Double-Nickase-Plasmid (m) und BTEB2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Klf5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BTEB2: sc-398470
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BTEB2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTEB2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Klf5 codiert den Transkriptionsfaktor BTEB2 (Krüppel-like factor 5), ein Zinkfinger-DNA-bindendes Protein, das Proliferations- und Differenzierungsprogramme in epithelialen und mesenchymalen Zelllinien reguliert. BTEB2 integriert Signale aus den MAPK/ERK-, Wnt/β-Catenin-, TGF-β- und PI3K/AKT-Signalwegen, um Zellzyklusprogression, Migration und Remodelling der extrazellulären Matrix zu steuern. Während Entwicklung und Gewebehomöostase beeinflusst die Klf5-Aktivität über kontextabhängige transkriptionelle Netzwerke die Dynamik der intestinalen Krypten, vaskuläre und glatte Muskelzell-Phänotypen sowie barrierebildende Epithelien. Eine fehlregulierte Klf5/BTEB2-Expression wurde mit entzündlichem Remodelling, Fibrose und onkogenen transkriptionellen Zuständen in Verbindung gebracht und macht Klf5 zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Wachstumskontrolle und Linienplastizität.
BTEB2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Klf5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Klf5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Klf5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Klf5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.