BTEB1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402170-ACT

KLF9 (BTEB1) kodiert einen Krüppel-like-Transkriptionsfaktor, der an GC-reiche Promotorelemente bindet und kontextabhängige Programme reguliert, die den Zellzyklusverlauf, die Differenzierung sowie die stressinduzierte Genexpression steuern. In humanen Zellen integriert BTEB1 Signale aus nukleären Rezeptor- und MAPK-assoziierten Signalwegen und formt dadurch transkriptionelle Output-Profile, die mit metabolischer Homöostase und endokriner Responsivität verknüpft sind. Eine veränderte KLF9-Expression wurde mit fehlregulierter Proliferation, inflammatorischer Signalübertragung und linienspezifischem Remodeling in Verbindung gebracht, was KLF9 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Störungen transkriptioneller Netzwerke macht. Diese Eigenschaften unterstützen mechanistische Forschung zur Chromatinregulation, stimulusabhängigen Transkription und krankheitsrelevanten Genexpressionssignaturen.

BTEB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLF9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTEB1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLF9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLF9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTEB1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLF9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTEB1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTEB1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLF9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.