BTC Double Nickaseプラスミド (h): sc-401927-NIC

ベータセルリュリン（BTC）は上皮成長因子受容体（EGFR）ファミリーの分泌性リガンドであり、EGFRおよびERBB4に結合して受容体型チロシンキナーゼシグナル伝達を活性化します。BTCによるMAPK/ERKおよびPI3K–AKT経路の活性化は、上皮細胞の増殖・生存・分化を制御し、さらに組織修復や発生プログラムにも関与します。膵臓および消化管の文脈では、BTCは内分泌系と上皮の恒常性に影響するパラクラインコミュニケーションに寄与します。BTC–ERBBシグナルの破綻は、増殖制御の変化や炎症性微小環境におけるシグナル伝達に関与するとされ、BTCは疾患モデルにおけるEGFR経路生物学の機序研究において重要な結節点となります。

BTC ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BTC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BTC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BTCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BTCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。