BTC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401927-ACT

ヒトBTCはベータセルリン（betacellulin）をコードしており、上皮増殖因子（EGF）ファミリーのリガンドの一つです。BTCは膜結合型の前駆体として合成され、プロテアーゼによるシェディング（切断）によって放出されることで、自己分泌および傍分泌の状況下でシグナルを伝達します。BTCはEGFR/ERBB受容体を活性化し、下流のMAPK/ERKおよびPI3K/AKTシグナル伝達を介して、細胞増殖・生存・遊走、ならびに上皮—間葉相互作用を制御します。その発現は組織リモデリングや炎症性シグナルの過程で調節されており、がん生物学における増殖因子回路の変化や、膵島機能を含む心代謝・内分泌に関連する文脈とも関連づけられています。分泌型／膜係留型の増殖因子として、BTCは受容体—リガンド動態、転写プログラム、そして細胞状態の遷移に影響する経路間クロストークの研究にしばしば用いられます。

BTC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BTCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BTC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BTC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBTC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BTCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBTC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBTC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBTC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBTC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。