BTBD4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405127-ACT

ZBTB46 kodiert das menschliche Zinkfinger- und BTB-Domänen-Protein BTBD4, einen Transkriptionsregulator, der an der Aufrechterhaltung der Linienidentität dendritischer Zellen beteiligt ist und Aktivierungsprogramme in hämatopoetisch abgeleiteten antigenpräsentierenden Zellen begrenzt. Über BTB/POZ-vermittelte Proteininteraktionen und DNA-Bindungsaktivität beeinflusst BTBD4 Genexpressionsnetzwerke, die die myeloide Differenzierung, die Immunhomöostase und kontextabhängige entzündliche Signalgebung prägen. Eine veränderte Regulation ZBTB46-assoziierter Transkriptionsprogramme wurde mit Immundysregulation und Phänotypen des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was ZBTB46 zu einem nützlichen Ziel für Studien zur Antigenpräsentation, Immunsuppression und Linienplastizität macht. Diese Funktionen positionieren BTBD4 an der Schnittstelle von transkriptioneller Kontrolle, Zellschicksalsentscheidungen und immunologischen Signalwegen, die für Krebs- und Entzündungskrankheitsmodelle relevant sind.

BTBD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZBTB46-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTBD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZBTB46-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZBTB46-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTBD4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZBTB46-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTBD4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTBD4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZBTB46-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.