BSPII Lentiviral Activation Particles (m): sc-421011-LAC

Das Mausgen *Ibsp* kodiert das Knochensialoprotein II (BSPII), ein sezerniertes, stark phosphoryliertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das in mineralisierten Geweben angereichert ist. BSPII bindet Hydroxylapatit und interagiert über ein RGD-Motiv mit Integrinen; dadurch trägt es während der Skelettentwicklung und des Remodelings zur Adhäsion von Osteoblasten, zur Organisation der Matrix und zur Einlagerung von Knochenmineral bei. *Ibsp* ist an osteogenen Differenzierungsprogrammen und an der Signalübertragung zwischen extrazellulärer Matrix und Rezeptoren beteiligt, mit Bezügen zu Signalwegen, die Zell–Matrix-Interaktionen und Biomineralisation regulieren. Eine veränderte *IBSP*-Expression ist mit Veränderungen der Knochendichte und mit Remodeling-Phänotypen assoziiert und wird häufig in Modellen der Osteogenese, der Parodontalbiologie sowie der Interaktionen zwischen Knochenmikroumgebung und skelettmetastasenbezogenen Prozessen untersucht.

BSPII Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ibsp-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BSPII Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ibsp-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BSPII-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ibsp-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.