Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400382

Übersicht

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit POU-Domäne, der zelltypspezifische Genexpressionsprogramme reguliert und eine wichtige Rolle bei der neuronalen Differenzierung sowie bei der Aufrechterhaltung der Identität sensorischer Neuronen spielt, insbesondere in retinalen Ganglienzellen. Durch Bindung an octamerähnliche DNA-Motive koordiniert BRN3B Transkriptionsnetzwerke, die Entwicklung, Überleben und Stressantworten steuern, und greift dabei in übergeordnete Transkriptionsregulationswege ein, die Zellschicksalsentscheidungen prägen. Eine veränderte POU4F2-Aktivität wurde mit fehlregulierter Differenzierung sowie kontextabhängigen Veränderungen von Proliferation und Apoptose in Verbindung gebracht, was sie für Untersuchungen neuroentwicklungsbezogener und neurodegenerativer Mechanismen ebenso wie für die krebsassoziierte transkriptionelle Umprogrammierung relevant macht. Als linienbestimmender Faktor wird es häufig als Marker und funktioneller Knotenpunkt in Modellen verwendet, die neuronale Identität und stimulusabhängige Transkription untersuchen.

Das Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POU4F2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POU4F2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POU4F2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Brn-3b/BRN3B/POU4F2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POU4F2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Brn-3b/BRN3B/POU4F2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POU4F2-Exone abzielen, die für die Brn-3b/BRN3B/POU4F2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POU4F2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Brn-3b/BRN3B/POU4F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POU4F2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Brn-3b/BRN3B/POU4F2 HDR-Plasmid (h) und Brn-3b/BRN3B/POU4F2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POU4F2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POU4F2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.