Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400392

Übersicht

POU3F2 (Brn-2/BRN2) ist ein POU-Homeodomänen-Transkriptionsfaktor, der an Oktamer-Motive bindet, um Genexpressionsprogramme zu regulieren, die die Festlegung von Zelllinien, die neuronale Differenzierung und die Aufrechterhaltung der Zellidentität steuern. Im Nervensystem trägt er zur kortikalen Entwicklung und zu neurogenen transkriptionellen Netzwerken bei, während er in von der Neuralleiste abstammenden Zelllinien Übergänge des Differenzierungszustands koordiniert. Eine aberrante POU3F2-Aktivität wurde mit fehlregulierten transkriptionellen Schaltkreisen in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, insbesondere beim Melanom, wo sie mit MAPK-getriebenen Zustandswechseln und invasionsassoziierten Programmen zusammenwirkt. Als nukleärer Regulator stellt BRN2 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um Enhancer-Promoter-Kontrolle, Chromatinbelegung und kontextabhängige transkriptionelle Umprogrammierung in humanen Zellen zu analysieren.

Das Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POU3F2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POU3F2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POU3F2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Brn-2/BRN2/POU3F2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POU3F2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Brn-2/BRN2/POU3F2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POU3F2-Exone abzielen, die für die Brn-2/BRN2/POU3F2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POU3F2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POU3F2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Brn-2/BRN2/POU3F2 HDR-Plasmid (h) und Brn-2/BRN2/POU3F2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POU3F2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POU3F2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.