Plásmido CRISPR de Activación (m) Brn-2/BRN2/POU3F2: sc-422351-ACT

Pou3f2 codifica el factor de transcripción con dominio POU Brn-2/BRN2/POU3F2, un regulador clave de la especificación y la maduración del linaje neural en el ratón. BRN2 se une a motivos de ADN tipo octámero para coordinar programas génicos que controlan la neurogénesis, la diferenciación neuronal y el mantenimiento de la identidad neural, integrándose con redes transcripcionales más amplias que determinan la accesibilidad de la cromatina y las transiciones de estado celular. Durante el desarrollo y en tejidos adultos, la actividad de Pou3f2 influye en linajes derivados de la cresta neural y del sistema nervioso central, vinculándola a procesos como la proliferación de progenitores, la migración y la expresión de genes sinápticos. Los circuitos transcripcionales asociados a BRN2 alterados se han estudiado en contextos como fenotipos del neurodesarrollo y la plasticidad de linaje en modelos de cáncer, lo que respalda su uso como un nodo para la interrogación de vías y redes génicas.

Brn-2/BRN2/POU3F2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pou3f2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Brn-2/BRN2/POU3F2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pou3f2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pou3f2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Brn-2/BRN2/POU3F2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pou3f2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Brn-2/BRN2/POU3F2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Brn-2/BRN2/POU3F2 en células tumorales con expresión de Pou3f2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.