Partículas Lentivirales de Activación (h) BRD9: sc-404933-LAC

BRD9 (bromodominio que contiene 9) es un lector de cromatina que reconoce residuos de lisina acetilada en las histonas y contribuye a la regulación epigenética de la transcripción. En células humanas, BRD9 funciona como un componente central del complejo de remodelación de cromatina SWI/SNF BAF no canónico (ncBAF/GBAF), influyendo en la actividad de los potenciadores, la accesibilidad de los promotores y los programas génicos específicos de linaje. A través de sus interacciones dependientes del bromodominio, BRD9 ayuda a coordinar respuestas transcripcionales vinculadas al control del ciclo celular, la diferenciación y la dinámica de la cromatina asociada al daño en el ADN. La actividad desregulada de BRD9 y la señalización de ncBAF se han estudiado en el contexto de dependencias transcripcionales oncogénicas y estados de cromatina aberrantes en múltiples modelos de cáncer.

Las partículas de activación lentiviral BRD9 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BRD9 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BRD9 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BRD9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BRD9. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BRD9 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.