BRD4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400519-LAC

BRD4 (Bromodomänen-enthaltendes Protein 4) ist ein Chromatin-Reader, der über seine Bromodomänen an acetylierte Histone bindet und durch die Rekrutierung von P-TEFb sowie die Regulation der Freisetzung der RNA-Polymerase II aus der Pausenphase die Initiation und Elongation der Transkription mitkoordiniert. Es ist ein zentraler Bestandteil der epigenetischen Kontrolle an Enhancern und Super-Enhancern und integriert Signalschaltkreise in Genexpressionsprogramme, die den Zellzyklus, Entzündungsprozesse und die linienspezifische Differenzierung steuern. BRD4-abhängige Transkriptionsnetzwerke überschneiden sich mit Signalwegen wie der NF-κB-Signalgebung und MYC-getriebenen Programmen, wodurch BRD4 zu einem zentralen Knotenpunkt in Studien zur „transcriptional addiction“ und zu fehlregulierten Chromatinzuständen wird. Veränderte BRD4-Aktivität und Enhancer-Remodeling sind mit proliferativen und entzündlichen Phänotypen assoziiert und stützen seine Nutzung in der mechanistischen Forschung in der Krebsbiologie, Immunologie und Entwicklungsregulation der Genexpression.

BRD4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente BRD4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BRD4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der BRD4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BRD4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen BRD4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.