Partículas Lentivirales de Activación (h) BRD4: sc-400519-LAC

BRD4 (proteína 4 que contiene bromodominio) es un lector de cromatina que se une a histonas acetiladas a través de sus bromodominios y ayuda a coordinar el inicio y la elongación de la transcripción mediante el reclutamiento de P-TEFb y la regulación de la liberación de la pausa de la ARN polimerasa II. Es un componente central del control epigenético en potenciadores (enhancers) y superpotenciadores (super-enhancers), integrando señales en programas de expresión génica que gobiernan la progresión del ciclo celular, la inflamación y la diferenciación específica de linaje. Las redes transcripcionales dependientes de BRD4 se intersectan con vías como la señalización de NF-κB y programas impulsados por MYC, lo que convierte a BRD4 en un nodo central en estudios de adicción transcripcional y estados de cromatina desregulados. La actividad alterada de BRD4 y la remodelación de potenciadores se asocian con fenotipos proliferativos e inflamatorios, lo que respalda su uso en investigación mecanística en biología del cáncer, inmunología y regulación génica del desarrollo.

Las partículas de activación lentiviral BRD4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BRD4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BRD4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BRD4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BRD4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BRD4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.