Plasmide CRISPR d'Activation (h) BRD3: sc-401493-ACT

BRD3 (bromodomain containing 3) est un membre de la famille BET de protéines lectrices épigénétiques, qui se lient aux lysines acétylées des histones via des bromodomaines en tandem et assurent le couplage entre l’état de la chromatine et la production transcriptionnelle. BRD3 participe à la régulation de la transcription dépendante de l’ARN polymérase II, au fonctionnement des enhancers et des super-enhancers, ainsi qu’au contrôle, associé à la chromatine, de la progression du cycle cellulaire et des programmes de différenciation. Par ses interactions avec la chromatine acétylée et des corégulateurs transcriptionnels, BRD3 contribue à façonner des réseaux d’expression génique liés à la signalisation inflammatoire et à la transcription spécifique de lignée. Une activité dérégulée des protéines BET, incluant des programmes transcriptionnels associés à BRD3 altérés, a été impliquée dans des dépendances transcriptionnelles oncogéniques et d’autres maladies caractérisées par une régulation aberrante des gènes, pilotée par la chromatine.

BRD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BRD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BRD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BRD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BRD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BRD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BRD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BRD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BRD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de BRD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.