Particules Lentivirales d'Activation (h) BRD2: sc-402584-LAC

BRD2 code la protéine 2 contenant un bromodomaine, un lecteur de la chromatine de la famille BET qui se lie aux histones acétylées afin de coordonner l’initiation et l’élongation de la transcription. BRD2 contribue à réguler la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les programmes géniques inflammatoires via des interactions avec des complexes transcriptionnels et la machinerie de remodelage de la chromatine. Elle participe au contrôle épigénétique de l’expression génique dans des voies liées à la prolifération et à la signalisation immunitaire, et une activité altérée de BRD2 a été associée à des états transcriptionnels dérégulés observés dans les cancers et les maladies inflammatoires. Ces propriétés font de BRD2 une cible pertinente pour étudier la transcription dépendante de la chromatine, la fonction des enhancers et la régulation des gènes en réponse à des stimuli dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRD2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BRD2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BRD2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BRD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BRD2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BRD2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.