BRD2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402584-ACT

BRD2 (Bromodomänen-enthaltendes Protein 2) ist ein Chromatin-Reader der BET-Familie, der über tandemartig angeordnete Bromodomänen an acetylierte Lysinreste auf Histonschwänzen bindet und so die Initiation und Elongation der Transkription koordiniert. Indem BRD2 die Aktivität von Promotoren und Enhancern mit der Rekrutierung transkriptionsregulatorischer Komplexe koppelt, trägt es zur Kontrolle des Zellzyklus, der DNA-Schadensantwort und linienspezifischer Genexpressionsprogramme bei. Die BRD2-abhängige Chromatinregulation überschneidet sich mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken und inflammatorischen Signalwegen und ist damit ein intensiv untersuchter Knotenpunkt der epigenetischen Steuerung von Proliferation und stressadaptiver Transkription. Eine dysregulierte BET-Proteinaktivität, einschließlich einer veränderten BRD2-Funktion, wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit einer aberranten Expression von Wachstums- und Immunantwortgenen in Verbindung gebracht.

BRD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BRD2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BRD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BRD2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BRD2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BRD2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BRD2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BRD2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BRD2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BRD2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.