Plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD1 (h): sc-406252

Présentation

BRD1 humain (bromodomain containing 1) est un régulateur associé à la chromatine qui reconnaît les résidus de lysine acétylée sur les queues d’histones via son bromodomaine, reliant ainsi l’acétylation des histones au contrôle transcriptionnel. BRD1 participe à des programmes épigénétiques qui façonnent l’expression génique au cours du développement et de la différenciation cellulaire, notamment en régulant l’activité des promoteurs et des enhancers par le remodelage de la chromatine et le recrutement de co‑régulateurs. En modulant des réseaux transcriptionnels liés aux voies neuronales et immunitaires, BRD1 a été étudié dans le contexte d’états d’expression génique altérés pertinents pour les troubles neuropsychiatriques et d’autres maladies complexes polygéniques. Son rôle à l’interface entre l’acétylation des histones et la transcription fait de BRD1 une cible utile pour disséquer les mécanismes dépendants de la chromatine qui influencent l’identité cellulaire et les réponses au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BRD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BRD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BRD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BRD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BRD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BRD1 pour l'étude de la signalisation de BRD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BRD1 essentiels à la fonction de BRD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BRD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BRD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BRD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BRD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BRD1 plasmide HDR (h) et le BRD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BRD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BRD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.