Plasmide Double Nickase (h) brachyury: sc-416539-NIC

Le gène humain **T** code le facteur de transcription à domaine T-box **brachyury**, un régulateur maître de la spécification du mésoderme et de la formation de l’axe corporel postérieur au cours du développement précoce. Brachyury se lie à des motifs T-box de l’ADN pour contrôler des programmes géniques coordonnant la transition épithélio‑mésenchymateuse, la migration cellulaire et l’engagement de lignée, en s’intégrant aux réseaux de signalisation WNT/β‑caténine, FGF et TGF‑β. Chez l’adulte et dans des contextes pathologiques, une activité altérée de brachyury est associée à des états de différenciation aberrants et à des programmes transcriptionnels liés à l’invasivité, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique central en biologie du développement et dans la recherche sur la plasticité des cellules tumorales. L’analyse de la régulation transcriptionnelle dépendante de T soutient les études des décisions de destinée cellulaire, de la dynamique des états de la chromatine et des interactions entre voies de signalisation dans des systèmes modèles et des lignées cellulaires ingénierées.

brachyury Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus T dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de T. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de T. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de T.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.