BR-cadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401987-ACT

CDH12 kodiert BR-Cadherin, ein klassisches Cadherin, das im Nervensystem besonders stark vertreten ist, Ca2+-abhängige homophile Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und die Gewebearchitektur unterstützt. Über die Bindung an Catenine und die Kopplung an das Aktin-Zytoskelett ist BR-Cadherin an der Organisation von Adherens Junctions, an der Zellpolarität und an koordinierten Migrationsprogrammen beteiligt, die die neuronale Entwicklung prägen. Veränderte Cadherin-Expression kann die Dynamik epithelialer/neuronaler Adhäsion stören und den Signalweg-Crosstalk mit Pfaden wie Wnt/β-Catenin sowie der durch Rho-GTPasen regulierten Zytoskelett-Remodellierung beeinflussen. Eine Fehlregulation von CDH12 wurde in Studien zu neurodevelopmentalen Phänotypen und zur Tumorbiologie beschrieben, was Untersuchungen dazu motiviert, wie Veränderungen des Adhäsionszustands Invasion, Konnektivität und Differenzierung beeinflussen.

BR-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH12-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BR-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH12-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH12-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BR-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH12-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BR-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BR-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH12-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.