Particules Lentivirales d'Activation (h) BPTF: sc-404092-LAC

BPTF (bromodomain PHD finger transcription factor) est un composant essentiel du complexe de remodelage de la chromatine NURF, qui reconnaît des marques d’histones via son doigt PHD et son bromodomaine afin de réguler le positionnement des nucléosomes et la production transcriptionnelle. En modulant l’accessibilité de la chromatine, BPTF influence des programmes d’expression génique dépendants de l’ARN polymérase II impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire, la spécification des lignages et les réponses aux dommages de l’ADN. Il participe à la régulation épigénétique au sein de voies du développement et de la prolifération, reliant les paysages de modifications des histones à l’activité des facteurs de transcription. Une expression ou une fonction dérégulée de BPTF a été associée à des états de chromatine altérés observés en cancérologie et dans les processus neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle.

Les particules d'activation lentivirales BPTF (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BPTF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BPTF (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BPTF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BPTF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BPTF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.