Plásmido CRISPR de Activación (h) BPTF: sc-404092-ACT

BPTF (factor de transcripción con dominio bromodominio y dedo PHD) codifica un componente regulador central del complejo NURF de remodelación de cromatina dependiente de ATP, que interpreta marcas de histonas y modula el posicionamiento de los nucleosomas para controlar programas de transcripción. Al acoplar un bromodominio y un dedo PHD a la actividad de remodelación de cromatina, BPTF influye en la función de los potenciadores, la accesibilidad de los promotores y la expresión génica específica de linaje durante el desarrollo y la diferenciación celular. La regulación dependiente de BPTF converge con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la organización de la cromatina, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en estudios de control epigenético. La expresión o actividad desregulada de BPTF se ha asociado con estados transcripcionales alterados observados en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres y fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia como un nodo mecanístico en la patología impulsada por la cromatina.

BPTF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BPTF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BPTF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BPTF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BPTF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BPTF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BPTF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BPTF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BPTF en células tumorales con expresión de BPTF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.