BPI Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404909

Descripción general

La BPI (proteína bactericida/aumentadora de la permeabilidad) es un componente de los gránulos de los neutrófilos y un factor de la inmunidad innata mucosa con alta afinidad por el lipopolisacárido (LPS) de las bacterias gramnegativas, donde neutraliza la actividad de la endotoxina y favorece la eliminación bacteriana al alterar la integridad de la membrana externa. Al unirse al LPS y modular las interacciones con la proteína de unión al LPS y con componentes de señalización de CD14/TLR4, la BPI puede influir en las respuestas inflamatorias posteriores y en la producción de citocinas. La expresión y la actividad de la BPI se evalúan comúnmente en el contexto de las interacciones huésped–patógeno, la degranulación de neutrófilos y la defensa de barrera. La desregulación del manejo del LPS y los niveles alterados de BPI se han investigado en afecciones inflamatorias de las vías respiratorias y del tracto gastrointestinal, en la biología de la sepsis y en la susceptibilidad a infecciones por bacterias gramnegativas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BPI (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BPI en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BPI junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BPI tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BPI.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BPI para la investigación de la señalización de BPI, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BPI críticos para la función de BPI
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BPI para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BPI CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BPI CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BPI. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BPI (h) y el plásmido HDR BPI (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BPI para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BPI definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.