Bok Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407699

Descripción general

BOK (BCL2-related ovarian killer) codifica Bok, un miembro proapoptótico de la familia de proteínas BCL-2 que contribuye a la apoptosis intrínseca al influir en la permeabilización de la membrana externa mitocondrial y en la activación posterior de las caspasas. Bok se ha relacionado con la biología del retículo endoplásmico y de las membranas asociadas a mitocondrias, e intersecta con vías de respuesta al estrés que integran la proteostasis y las decisiones sobre el destino celular. Por estos roles, BOK se estudia en contextos en los que se alteran los umbrales de apoptosis y la sensibilidad al estrés celular, incluidos la biología del cáncer, la señalización de estrés asociada a la neurodegeneración y la homeostasis tisular. Su regulación y el solapamiento funcional con otras proteínas de la familia BCL-2 lo convierten en un nodo útil para analizar la redundancia de vías y la predisposición a la apoptosis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Bok (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BOK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BOK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BOK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Bok.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BOK para la investigación de la señalización de Bok, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BOK críticos para la función de Bok
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BOK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Bok CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Bok CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BOK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Bok (h) y el plásmido HDR Bok (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BOK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BOK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.