Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Bob 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400771
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Bob 1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Bob 1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Bob 1: sc-23932
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Bob 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-400771 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
POU2AF1 (Bob 1/OBF-1) ist ein auf B‑Zellen beschränkter transkriptioneller Koaktivator, der an OCT1/POU2F1 und OCT2/POU2F2 bindet, um die Transkription von Immunglobulin-Genen sowie umfassendere Programme der Genexpression in B‑Zellen zu verstärken. Er unterstützt Keimzentrumsreaktionen, den Klassenwechsel (Class-Switch-Rekombination) und die Differenzierung zu Plasmazellen, indem er die Enhancer-Aktivität an Oktamer-Motiven mit Signalinputs integriert, die Aktivierung und Überleben von B‑Zellen prägen. Eine fehlregulierte POU2AF1-Expression und die damit verbundene transkriptionelle Schaltkreise wurden bei B‑Zell-Malignomen, einschließlich Lymphomen und Leukämien, sowie bei Immunphänotypen beschrieben, die mit veränderten humoralen Antworten einhergehen. Daher wird Bob 1 häufig in Signalwegen untersucht, die die B‑Zell-Identität, die antigengetriebene Reifung und die transkriptionelle Regulation von Immun-Effektorgenen steuern.
Das Bob 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POU2AF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POU2AF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POU2AF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Bob 1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POU2AF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Bob 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf POU2AF1-Exone abzielen, die für die Bob 1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere POU2AF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Bob 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Bob 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POU2AF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Bob 1 HDR-Plasmid (h) und Bob 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POU2AF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POU2AF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.