Plasmide CRISPR/Cas9 KO BNP (m): sc-421946

Présentation

Nppb code le peptide natriurétique de type B (BNP), une hormone cardiaque sécrétée dont l’expression est augmentée en réponse à l’étirement du myocarde et à des signaux neurohormonaux. Après maturation à partir de la proBNP, le BNP agit via les récepteurs des peptides natriurétiques pour stimuler l’activité guanylate cyclase, augmenter le cGMP et moduler le tonus vasculaire, la natriurèse et les programmes de remodelage cardiaque. Chez la souris, l’expression de Nppb est largement utilisée comme marqueur moléculaire du stress hémodynamique et de l’hypertrophie des cardiomyocytes, ce qui la relie à des voies contrôlant la fibrose, le renouvellement de la matrice extracellulaire et la signalisation inflammatoire. Une signalisation BNP/NP dérégulée est pertinente pour les études portant sur la surcharge de pression cardiaque, les phénotypes de remodelage associés à l’insuffisance cardiaque et l’homéostasie cardio-rénale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BNP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nppb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nppb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nppb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BNP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nppb pour l'étude de la signalisation de BNP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nppb essentiels à la fonction de BNP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nppb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BNP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BNP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nppb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BNP plasmide HDR (m) et le BNP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nppb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nppb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.