Plasmide Double Nickase (h) BNIP-3: sc-400985-NIC

Le gène humain **BNIP3** code BNIP-3, une protéine BH3-only atypique qui se localise aux mitochondries et régule les décisions de destin cellulaire en situation d’hypoxie et de stress métabolique. BNIP-3 participe au contrôle qualité mitochondrial en favorisant la mitophagie via des interactions avec LC3 grâce à son motif LIR, et peut également influencer la perméabilité mitochondriale ainsi que les programmes de mort cellulaire selon le contexte. Son expression est étroitement liée à la signalisation HIF-1, à l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et aux modifications de la phosphorylation oxydative, reliant BNIP-3 à des voies plus larges qui contrôlent la bioénergétique et l’adaptation au stress. Une activité de BNIP-3 dérégulée a été associée à des affections caractérisées par des lésions hypoxiques et un dysfonctionnement mitochondrial, notamment en cancérologie, dans les dommages liés à l’ischémie et dans la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques des réponses au stress.

BNIP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BNIP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BNIP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BNIP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BNIP3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.