Particules Lentivirales d'Activation (h) BMP-8A: sc-406589-LAC

BMP8A code la protéine morphogénétique osseuse 8A (BMP‑8A), un ligand sécrété de la superfamille TGF‑β qui transmet le signal via les récepteurs BMP de type I/II afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/9. BMP‑8A contribue à l’organisation du développement et à l’homéostasie tissulaire en régulant les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et les processus morphogénétiques, avec un dialogue en aval avec les voies MAPK pouvant affiner des réponses spécifiques au contexte. Une activité altérée de la voie BMP — notamment une disponibilité dérégulée des ligands ou une signalisation récepteur‑SMAD perturbée — est largement associée à des défauts d’organogenèse et à des modifications pertinentes pour la maladie de la prolifération, de la différenciation et du remodelage de la matrice extracellulaire. En tant que ligand BMP humain, BMP‑8A constitue donc un nœud utile pour disséquer la dynamique de la signalisation BMP/TGF‑β dans la biologie des cellules souches et des modèles du développement.

Les particules d'activation lentivirales BMP-8A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BMP8A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BMP-8A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BMP8A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BMP-8A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BMP8A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.